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        大鼠海馬神經元細胞操作說明

        點擊次數:830 發布時間:2019/9/4
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                                  大鼠海馬神經元細胞操作說明

        菊花仙子也毫不示弱,它們爭奇斗艷。有的穿上了紫色的連衣裙,有的穿上了雪白的花裙子,有的穿上紅彤彤的衣袍,還有的穿上了金黃的晚禮服。接下來介紹  大鼠海馬神經元細胞操作說明。

        操作規程:

        一.培養基及培養凍存條件準備:

        1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。

        2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

        3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。

        二.細胞處理:

        1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

        2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

        對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

        方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

        優點:
        1.研究的對象是活細胞
        在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
        2.研究條件可以人為控制
        pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
        3.研究的樣本可以達到比較均一性
        通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
        4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
        采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。